賽默飛培養(yǎng)箱滅菌程序

    在細(xì)胞培養(yǎng)工作中，微生物污染是實驗人員面臨的主要挑戰(zhàn)之一。定期對培養(yǎng)箱進(jìn)行滅菌，是保障細(xì)胞健康生長的關(guān)鍵措施。賽默飛371、3111等型號培養(yǎng)箱配備了專業(yè)的140℃高溫干熱滅菌程序，能有效殺滅包括支原體、霉菌、細(xì)菌和難以殺滅的孢子在內(nèi)的各類微生物。本文將詳細(xì)介紹這一程序的操作流程與注意事項。

一、為什么需要專門的滅菌程序？

    許多實驗室日常會用70%酒精擦拭培養(yǎng)箱內(nèi)壁，但這只能進(jìn)行表面消毒，無法殺滅隱藏在角落、傳感器縫隙和HEPA過濾器深處的頑固微生物。

    賽默飛培養(yǎng)箱的140℃高溫干熱滅菌程序通過將腔體加熱至140℃并維持一定時間，實現(xiàn)對整個內(nèi)腔的滅菌。這一程序的優(yōu)勢在于：

    全面：高溫能滲透到每個角落，殺滅所有微生物

    無需拆卸：TC熱導(dǎo)傳感器可留在腔內(nèi)，無需取出

    高效快速：高溫消毒階段不到3小時，總循環(huán)不到12小時

二、滅菌前的準(zhǔn)備工作

    在執(zhí)行滅菌程序前，必須完成以下準(zhǔn)備工作，任何疏漏都可能導(dǎo)致設(shè)備損壞或滅菌失敗。

    2.1清空培養(yǎng)箱

    將所有細(xì)胞培養(yǎng)物、培養(yǎng)基、試劑等轉(zhuǎn)移到其他培養(yǎng)設(shè)備中

    取出所有可移動部件：不銹鋼擱板、擱板支架、加濕水盤

    倒掉水盤中的水并清洗干凈

    2.2取出HEPA過濾器

    這是最重要的一步：必須取出位于箱內(nèi)或后部的HEPA高效空氣過濾器。HEPA過濾器無法耐受140℃高溫，留在箱內(nèi)會損毀。

    2.3基礎(chǔ)清潔

    用溫和的中性清潔劑或70%乙醇擦拭內(nèi)腔、門內(nèi)側(cè)以及取出的擱板等部件，去除表面的灰塵和有機(jī)物殘留。

三、滅菌程序的啟動與運行

    3.1啟動程序

    確認(rèn)箱體清空且HEPA過濾器已取出后，關(guān)閉箱門

    找到控制面板上的滅菌循環(huán)按鈕（Steri-Cycle）

    長按按鈕3-5秒，直至指示燈亮起，屏幕顯示滅菌程序啟動提示

    3.2程序運行過程

    滅菌程序?qū)⒆詣油瓿缮郎?、保溫和冷卻三個階段：

    升溫階段：箱內(nèi)溫度逐漸升高至140℃

    保溫階段：在140℃維持2-3小時。這是殺滅所有微生物的關(guān)鍵時期，能確保殺滅包括芽孢在內(nèi)的所有污染物

    冷卻階段：程序結(jié)束后自動進(jìn)入冷卻，整個過程約需12小時

    3.3運行期間注意事項

    程序運行期間請勿打開箱門

    無需進(jìn)行任何參數(shù)設(shè)置，設(shè)備會自動監(jiān)控全過程

    確保實驗室電源穩(wěn)定，避免中途斷電

四、滅菌后的恢復(fù)工作

    4.1等待冷卻

    必須等待內(nèi)部溫度自然降至安全范圍（通常低于60℃）后，才能打開箱門，以防燙傷或玻璃門因驟冷而破裂。

    4.2重新安裝部件

    待箱體冷卻后：

    重新安裝已清潔的擱板、支架等部件

    裝回HEPA過濾器

    向加濕水盤加入新鮮的無菌蒸餾水或去離子水至推薦水位

    4.3必須進(jìn)行的校準(zhǔn)

    滅菌程序結(jié)束后，必須執(zhí)行CO?傳感器歸零校準(zhǔn)。這是因為高溫可能影響傳感器的零點。

    校準(zhǔn)步驟：

    將CO?設(shè)定值設(shè)為0%

    開門讓箱內(nèi)外空氣充分交換數(shù)分鐘

    關(guān)門穩(wěn)定運行12小時以上

    進(jìn)入校準(zhǔn)菜單，執(zhí)行CO?零點校準(zhǔn)

    4.4溫度驗證

    如有條件，可使用經(jīng)計量認(rèn)證的外部溫度記錄儀放入箱內(nèi)，與培養(yǎng)箱自身顯示溫度進(jìn)行比對，驗證其準(zhǔn)確性。

五、注意事項與安全提示

    5.1壓力控制

    滅菌過程中及日常使用中，CO?進(jìn)氣壓力要求分壓<0.07MPa。過大的壓力會充壞過濾膜，導(dǎo)致系統(tǒng)不穩(wěn)定。

    5.2滅菌頻率建議

    根據(jù)使用情況，建議每3-6個月執(zhí)行一次完整的高溫滅菌循環(huán)。若使用頻繁、培養(yǎng)物種多樣或曾發(fā)生污染，應(yīng)縮短周期。

    5.3電磁閥保護(hù)

    若長時間不使用培養(yǎng)箱，必須把CO?設(shè)置為0，否則電磁閥長期處于工作狀態(tài)會發(fā)熱損壞。

    5.4異常情況處理

    若有異常情況應(yīng)立即斷開電源使儀器終止運轉(zhuǎn)。儀器表面不可與汽油、香蕉水等揮發(fā)性化學(xué)品接觸。

六、滅菌效果驗證

    為確認(rèn)滅菌程序的效果，可定期進(jìn)行箱體菌落沉降實驗：

    在滅菌后的培養(yǎng)箱內(nèi)放置瓊脂培養(yǎng)皿

    開門暴露一定時間后關(guān)閉，培養(yǎng)觀察菌落生長情況

    如無微生物生長，說明滅菌效果良好

總結(jié)

    賽默飛培養(yǎng)箱滅菌程序的140℃高溫干熱滅菌技術(shù)，是保障細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境潔凈的重要工具。掌握規(guī)范的滅菌操作流程，核心在于充分準(zhǔn)備、嚴(yán)格執(zhí)行、恢復(fù)校準(zhǔn)：

    準(zhǔn)備階段：清空箱體、取出HEPA過濾器、清潔內(nèi)腔

    執(zhí)行階段：啟動程序，等待12小時完成升溫和滅菌

    恢復(fù)階段：等待冷卻、重新安裝部件、校準(zhǔn)CO?傳感器

    遵循本文所述的操作要點，您就能有效去掉培養(yǎng)箱內(nèi)的微生物污染，為細(xì)胞提供穩(wěn)定可靠的生長環(huán)境。