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技術文章
2019-1118
2019-1112
一、實驗原理細胞培養(yǎng)可分為原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)。直接從體內(nèi)獲取的組織細胞進行培養(yǎng)為原代培養(yǎng)；當原代培養(yǎng)的細胞增殖達到一定密度后，則需要做再培養(yǎng)，即將培養(yǎng)的細胞分散后，從一個容器以1：2或其他比率轉(zhuǎn)移到另一個或幾個容器中擴大培養(yǎng)，為傳代培養(yǎng)，傳代培養(yǎng)的累積次數(shù)就是細胞的代數(shù)。細胞凍存及復蘇的基本原則是慢凍快融，實驗證明這樣可以大限度的保存細胞活力。目前細胞凍存多采用甘油或DMSO作保護劑，這兩種物質(zhì)能提高細胞膜對水的通透性，加上緩慢冷凍可使細胞內(nèi)的水分滲出細胞外，減少細胞內(nèi)冰晶的...
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小鼠子宮頸癌細胞胞培養(yǎng)步驟培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備1)準備DMEM培養(yǎng)基(DMEM,GIBCO,貨號11965-092),90%;胎牛血清,10%2)培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37C,培并箱濕度為709%-80%。凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存有1mlL細抱縣液的凍存管迅速放入37C水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖売解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,...
查看更多2019-119
按以下操作可避免血清沉淀的產(chǎn)生：1、解凍血清時，請隨時將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生。2、血清分裝凍存時，須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡)，使溫度與成分均一。3、血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無須做此步驟。4、勿直接由-20℃直接至37℃解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質(zhì)凝結而發(fā)生沉淀。5、勿將血清置于37℃太久，否則血清會變得渾濁，同時血清中許多較不穩(wěn)定的成份也會因此受到破壞，從而影響血清的品質(zhì)。6、若必須做血清的熱滅活，請遵守56℃...
查看更多2019-118
一、大鼠神經(jīng)元細胞（酶消化法）簡述：新生24h或E18胎鼠，取腦，剝離海馬，剪碎，木瓜酶消化，清洗過篩后鋪于多聚賴氨酸包被的培養(yǎng)板中。二、大鼠雪旺細胞（植塊法）簡述：新生24h大鼠，取坐骨神經(jīng)，剝?nèi)ネ饽ず褪?，剪?mm3的小塊，均勻鋪于培養(yǎng)皿內(nèi)，加少量血清，37℃CO2培養(yǎng)2h后，再加入培養(yǎng)基，24-48h后有細胞爬出。三、大鼠胰島（酶消化加密度梯度離心）簡述：SD大鼠，常規(guī)麻醉、固定、消毒、進腹、膽總管插管，逆行注入預冷的１mg/ml膠原酶P溶液10ml。迅速取下胰腺，3...
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