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技術(shù)文章
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技術(shù)文章
2019-1021
一、形態(tài)學(xué)鑒定1.在倒置顯微鏡中直接觀察活細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特征2.細(xì)胞染色檢查：a)將無菌玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，加細(xì)胞懸液后培養(yǎng)；b)待細(xì)胞長(zhǎng)滿玻片后取出，用PBS清洗，之后放于載玻片上，待其自然干燥；c)用PBS/甲醇（1:1）固定15分鐘；d)棄固定液，加合適的染色液染色；e)染色完畢后用清水洗凈，置于空氣中干燥，f)干燥后，用二甲苯透明，光學(xué)樹脂封片后觀察。二、免疫組織細(xì)胞化學(xué)鑒定1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片；2.PBS清洗標(biāo)本3...
查看更多2019-1018
一、貼壁細(xì)胞的消化法傳代1、吸除或倒掉瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液。2、加入1ml左右消化液（胰蛋白酶或與EDTA混合液）輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)瓶，使瓶底細(xì)胞都浸入溶液中。3、消化2-5分鐘后把培養(yǎng)瓶放置在顯微鏡下進(jìn)行觀察，發(fā)現(xiàn)原貼壁的細(xì)胞逐漸趨于圓形，在還未漂起時(shí)，棄去消化液，加入培養(yǎng)液終止消化。4、用吸管將貼壁的細(xì)胞吹打成懸液，分別接種到另外兩到三個(gè)培養(yǎng)瓶中，置37℃培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。第二天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。二、懸浮細(xì)胞的傳代1、直接傳代①讓懸浮細(xì)胞慢慢沉淀在瓶底后，將上清吸掉1/2-2/3。②用...
查看更多2019-1017
細(xì)胞凍存技術(shù)實(shí)驗(yàn)室低溫保存設(shè)備包括：液氮保存箱、液氮罐、-140℃/-150℃深冷低溫保存箱、-86℃超低溫冰箱、程控降溫儀、低溫冰箱（-20℃、-30℃、-40℃）、藥品保存箱、疫苗保存箱、血庫(kù)冰箱、層析柜、防爆冰箱、防火冰箱等。檢驗(yàn)冰箱可靠性和制冷能力的方法：1、常規(guī)冰箱放置溫度計(jì)；2、超低溫冰箱放置加熱器、大量樣品或反復(fù)開門1.凍存保護(hù)劑很多化合物都可以作為凍存保護(hù)劑，它們既可以單獨(dú)使用也可以聯(lián)合使用，例如糖、血清和去污劑。雖然凍存沒有的準(zhǔn)則，但是大家普遍認(rèn)為二甲基亞砜...
查看更多2019-1016
凡是混入細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境中對(duì)細(xì)胞生存有害的成分和造成細(xì)胞不純的異物都可視為污染。細(xì)胞污染可分為三大類：微生物污染、細(xì)胞間交互污染和化學(xué)污染。微生物污染：包括真菌、細(xì)菌、支原體和病毒污染。細(xì)胞間交互污染：指的是非同種的其他細(xì)胞污染化學(xué)污染：指影響細(xì)胞生存的非細(xì)胞所需的化學(xué)成分。一、微生物污染細(xì)菌和真菌污染是較容易發(fā)現(xiàn)的，而病毒、支原體和其他細(xì)胞系的污染是不容易被察覺的。1.細(xì)菌污染時(shí)培養(yǎng)液pH值改變，溶液變渾濁。細(xì)菌的大量增殖導(dǎo)致細(xì)胞液中營(yíng)養(yǎng)大量消耗，并產(chǎn)生毒素抑制細(xì)胞的生長(zhǎng)，終導(dǎo)...
查看更多2019-1015
1.液體培養(yǎng)基的保存是冷藏好？還是冷凍好？要冷藏！因?yàn)橐后w培養(yǎng)基經(jīng)冷凍后再經(jīng)溶化時(shí)，其溶液的PH值會(huì)發(fā)生改變，溶液往往變堿，某些成分溶解也會(huì)受到影響對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)不利。故液體培養(yǎng)基一定要存放在冷藏箱中，通常液體培養(yǎng)基在冷藏條件下可存放6個(gè)月~一年。2.液體培養(yǎng)基中谷氨酰胺的作用，及使用方法。幾乎所有的細(xì)胞對(duì)谷氨酰胺有較高的要求，細(xì)胞需要谷氨酰胺合成蛋白質(zhì)，在缺少谷氨酰胺時(shí)，細(xì)胞生長(zhǎng)不良而死亡。所以，各種培養(yǎng)液中都含有較大量的谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定，應(yīng)置-20?C冰凍保...
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