HA人星形膠質(zhì)細胞

 【產(chǎn)品規(guī)格】25cm2 培養(yǎng)瓶
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復(fù)蘇基本技術(shù):
（a）從液氮容器中取出細胞凍存管后，立即將細胞凍存管直接浸入37%水浴中，在1－2分鐘內(nèi)搖動細胞凍存管至凍存的細胞融化。
（b）用75%酒精消毒細胞凍存管后，小心打開蓋子，用吸管吸出細胞懸浮液至15ml離心管中，緩慢加入5ml培養(yǎng)基后800rpm離心5分鐘，棄上清，加3－5ml培養(yǎng)基重懸至細胞培養(yǎng)瓶中，然后放入5%CO2、95%空氣、37℃培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)。
注：建議使用新鮮配制的培養(yǎng)體系
（c）另外，細胞計數(shù)，確定細胞數(shù)量。
（d）24小時更換一次培養(yǎng)液，繼續(xù)在5%CO2,  95%空氣、37℃培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)。
注：建議使用新鮮配制的培養(yǎng)體系
細胞注意事項：
①在細胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作
②培養(yǎng)基于 4℃條件下可保存 3-6 個月
③傳代培養(yǎng)過程中，胰酶消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)
④該細胞只可用于科研
YB-ATCC-2736    MG-63(骨肉瘤細胞)    進口美國ATCC細胞株，1ml/株
YB-ATCC-2737    HEC-1-B(子宮內(nèi)膜腺癌細胞)    進口美國ATCC細胞株，1ml/株
YB-ATCC-2738    SW1353(骨肉瘤細胞)    進口美國ATCC細胞株，1ml/株
YB-ATCC-2739    ES-2(卵巢透明細胞癌細胞)    進口美國ATCC細胞株，1ml/株
YB-ATCC-2740    Saos-2(成骨肉瘤細胞)    進口美國ATCC細胞株，1ml/株
YB-ATCC-2741    MDA-MB-468(乳腺癌細胞)    進口美國ATCC細胞株，1ml/株
YB-ATCC-2742    SK-MES-1(肺鱗癌細胞)    進口美國ATCC細胞株，1ml/株
YB-ATCC-2743    MDA-MB-435S(乳腺癌細胞)    進口美國ATCC細胞株，1ml/株
YB-ATCC-2744    NCI-H661(大細胞肺癌細胞)    進口美國ATCC細胞株，1ml/株
YB-ATCC-2745    ZR-75-1(乳腺癌細胞)    進口美國ATCC細胞株，1ml/株

 HA人星形膠質(zhì)細胞

 操作步驟：

1）復(fù)蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。

 2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。      
     1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
     2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。     
     3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
     4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
 3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；
    1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
    2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識。
    3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

注意事項：

1.動作要快，胰酶消化，換液什么，細胞暴露在空氣中的時間越少越好。另外，要掌握好胰酶消化時間，所謂的細胞狀態(tài)差，很多時候是傳代的原因。
3.有時間的話，需要細胞計數(shù)，傳相應(yīng)數(shù)目的細胞到培養(yǎng)皿中，可以大致清楚細胞的生長曲線，不會臨時要處理，手足無措。
3.要做什么心里要非常清楚，合理安排時間，細胞房的實驗穿插進行，可以節(jié)省很多時間，也不會耽誤別人的實驗。
4.個人的實驗器具自己收一套，不要和別人混用，zui近換了什么新的東西稍微記一下，試劑一旦懷疑污染，馬上丟。
5.細胞房不能進去太多人，避免相互干擾。